流式细胞仪-CyFlow Space
德国Partec是全球三大流式细胞仪生产厂家之一,其产品遍布全球180多个国家和地区,是卓越性能和优良品质的代名词。公司成立于1967年,Partec公司早在1968年生产出第一台商用流式细胞仪,是流式细胞仪的制造先驱。2013年Sysmex公司收购Partec公司后,成立Sysmex-Partec公司。Sysmex-Partec公司研制了新一代智能CyFlow®系列流式细胞仪和CyFlow®分选系统。具备经典、稳定的光学、液流系统,结合目前先进的计算机和数字电子技术,实现了流式细胞仪智能化、操作便捷化的革命。
一、灵活搭配激光,最高五激光十三色配置
CyFlow® Space设计紧凑,其所有的模块和组件仅容纳在长560×宽650×高300mm的狭小空间内,相对于其他可用FCM系统,CyFlow® Space不需要连接任何外部设备。组件模块化设计,可根据用户需求进行光路调整,包括激光器更换、荧光通道更换等,易于维护。可选配CyFlow® Robby自动进样系统,兼容96孔板、384孔板,可在15min完成96孔板分析。CyFlow® Space最高配置5个光源,包括4个可选激光器和高能365nm紫外光光源,配置13个荧光通道,可检测16个光学参数(13个荧光通道+2×FSC+SSC)。
CyFlow® Space——可选择的激光光源
二、最低检测50nm颗粒
大部分常规流式细胞仪的分辨率都在200-500nm之间,无法分析纳米级生物颗粒,例如细菌、病毒、亚细胞器和细胞外囊泡(EV)等颗粒。在检测小颗粒时,侧向角散射光分辨率优于前向角散射光,首要原因在于大部分流式细胞仪的前向角检测器使用低灵敏度的二极管,侧向角检测器和荧光信号检测器都使用了高灵敏度的光电倍增管(PMT)或雪崩式光电二极管(APD),如果前向角也使用高灵敏度的PMT或APD呢?在检测纳米颗粒时,SSC的效果还是要比FSC好,原因在于如果检测颗粒直径远大于入射光波长,即常规检测细胞的情形,散射光符合米氏散射规律(Mie scattering theory),散射光的信号强度和测量角度密切相关,前向角的检测效率优于侧向角,但如果在检测纳米颗粒时,直径远小于入射光波长,符合瑞利散射规律,检测角度并不是影响散射光效率的因素,侧向角的背景信号会远低于前向角,所以SSC在检测纳米颗粒时分辨率会比FSC更有优势。
CyFlow® Space采用经典稳定的PMT光电倍增管检测器,前向角FSC也采用PMT而非低灵敏度的二极管,保证了前向角的分辨率,可以最低检测50nm颗粒,CyFlow® Space在纳米级颗粒分析提供足够的优势。
使用CyFlow® Cube8可检测100nm颗粒
使用CyFlow® Space可检测45nm颗粒
三、TVAC定体积绝对细胞计数功能
CyFlow® Space采用定体积细胞绝对计数方法(TVAC)对所有颗粒或细胞的浓度进行测定。这种先进的专利技术完全基于绝对计数来实现,即:颗粒浓度(C)是给定体积(V)内的细胞数量(N),C= N/V。给定体积(V)是在已知直径的的样品管内两个电极之间的距离或者控制样品速度的体积进行测量。
TVAC的特点:
1、绝对计数变异系数CV≤2%;
2、无需校正微球,节约成本;
3、无校正微球所引起的误差,提高精度;
4、节约成本,简化准备步骤。
四、高精度石英流动室
Partec拥有超过40年的流动室设计经验与技术,其生产的高机械精密度石英流动室尺寸为250um×350um,孔径大不易堵塞,散射粒度范围跨度涵盖50nm至200µm。其核心技术是颗粒在高速流经流动室时,通过高压鞘液的包裹,准确、稳定、连续地通过各个激光的光斑中心,被激发的荧光信号通过光胶耦合下的大孔径物镜被最大程度地接收。高精度石英流动室的专利技术可保证所有参数的精确度达到很高,即变异系数CV≤2%,样本采用计算机控制推进器技术,其单一方向通过流动室,有效避免了交叉污染。
五、注射泵驱动系统
CyFlow® Space采用注射泵驱动进样,不存在挤压管路造成管路变形的情况,耗材不易损坏,寿命长达十年左右。所以由注射泵系统控制的绝对计数方式精确度很高,可长期保持液路稳定。进样速度0-1200ul/min连续精确可调,调节精度0.1μL/s。液路简单,部分可兼容不同上样管。
六、细胞分选系统
CyFlow®分选系统是Sysmex-Partec在流式细胞仪方面近50年的研究结晶。为了克服在常见分选过程中遇到的问题,诸如:分选成本过高、操作复杂、样品液滴容易暴露于生物危害较高的气溶胶中、分选样本易受污染、机械压力等,Sysmex-Partec公司研发出了无菌封闭式的CyFlow®分选系统。CyFlow®分选机的模块组成包括一个用于压电激活的金刚石压电元件和电子装置。压晶体管可以迅速准确地使分选好的细胞偏转到流动单元的第二通道。CyFlow®分选机是Sysmex-Partec CyFlow® Space的可选设备,并作为一个优化模块用于简化和精确的细胞和颗粒分选操作。
在压电激活过程中(图1和2所示),将产生一个轻微的压力波(图3所示),因此,一小部分鞘液携带目的细胞或颗粒发生偏转(图4所示)。只要有细胞需要进行分选,分选过程中的压电激活将会不断地重复。整个分选过程非常平稳,而且不存在传统滴液分选的机械压力等问题。因此,即使是易碎的细胞或大颗粒,在被CyFlow®分选机分选时不会在偏转过程中产生变形和其它外力作用。另外,CyFlow®分选机的一个特殊功能是可以在同个区域内对所有细胞进行正确分选。此高效率得益于数据采集系统几乎无空载时间。整个仪器硬件和软件都是实时运行不被打断的,所以不会丢失任何数据,而这种情况则经常发生在其他现有的分选仪器上。因此 CyFlow®分选机不会出现细胞分选的错误,保证分选达到最高纯度。
Sysmex-Partec CyFlow®分选系统极其稳定,又因为整个系统是封闭的,非弹性的,并且没有空气,因此不会产生任何干扰颗粒分析的振动,而在滴液分选仪器上则会经常发生这种问题。另外,基于CCD摄像机可以很容易地对分选延迟时间进行调节,所以微观检查是没有必要的。同时,Sysmex-Partec分选机在低压力的毛细管系统中运作,保证细胞形态和细胞活力(如像植物原生质体一样易碎的颗粒)将不会在分选过程中遭到损坏,从而实现了长时间的分选运行(可达上百毫升的样本体积)。这款分选装置可以安全的避免在常规操作条件下可以避免任何的环境污染。
在对测量和压电激活之间的延迟时间控制方面,CyFlow®分选机可以对其进行极为精确和稳定的系统控制。CyFlow® Space的另一个特点是其内置了CCD摄像机装置,它允许实验者直接在仪器的屏幕上对整个分析过程进行检查,即使在分选过程中也可以进行这样的操作。
CyFlow®分选系统的特点:
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操作简便,两步操作,就像按快门一样轻松;
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高生物安全性,无菌、全封闭设计;
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采用不加电、不加压的专利钻石压电晶体分选技术,保证分选细胞活力;
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低成本,无需等待液流稳定,无需计算液滴延迟。
七、FLOMAX®软件功能强大且直观
Windows™ FloMax™软件可以完成仪器控制、数据分析的各种功能,这些功能包括数据的实时采集、实时或离线数据分析、实时或离线的荧光补偿等功能。该软件可自由选择、组合不同的参数设置界面和数据处理界面,便于不同应用程序之间完成切换。FloMax™被用于免疫学、微生物学、细胞周期分析、DNA 定量、倍性分析等所有应用领域。数据以流式细胞仪标准文件格式存储,方便与其他分析软件进行数据处理。FloMax™一个独特的功能是,在进行分析的同时,对荧光的光谱重叠进行数字形式的在线/离线颜色串扰补偿。N色软件补偿算法允许在任何参数之间进行串扰校正,而不需要重新跑样。
FloMax®软件系统完全支持CyFlow® Space的定体积绝对计数功能,即使在数据获取之后,也能显示任何细胞亚群的颗粒浓度。
FloMax™软件规格
_ 基于 WindowsTM 的 FloMax®软件,适用于常规工作和研究应用
_ 可编辑 FloMax®用户环境
_ 原始数据的存储和评估采用流式细胞仪标准文件格式(FCS 2.0, 3.0)
_ 8-16 个光学参数,可进行实时数据采集、分析和显示
_ 64 个计算参数和时间参数
_ 一个参数的柱状图和二个参数的散点图
_ 64-4096 的通道分辨率用于 1P 柱状图
_ 64/64-4096/4096 通道用于 2P 点图
_ 线性 | 三个 log | 四个 log(可选)
_ 任意参数的单触发或触发所有
八、FCS Express数据分析软件
FCS Express软件专注于将流式细胞仪数据转化为结果。FCS Express可为您提供快速数据分析,创建可发布出版物的图表,提供高级筛选工具等功能。通过将数据直接导出为PowerPoint,PDF,Excel,Word和高分辨率图像格式,可以更快地获得结果。
FCS Express软件特点:
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集成电子表格;
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出版期刊专用图形;
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FDA列出的第一个第三方流式细胞术数据分析软件;
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光谱分析;
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数据分析符合FDA的《电子记录和电子签名规则》(CFR Part 11 Compliance);
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tSNE / SPADE / k-means等数据转移;
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轻松创建和应用补偿;
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批量处理数据;
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门移动或数据更改时,统计值将实时更新;
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热图显示流式细胞图像统计。
特点
概述:
●选用国际大厂的激光器和滤光镜,高质量的组件是性能稳定的保障;
●组件模块化,可根据用户需求进行光路调整,包括激光器更换、荧光通道更换,方便维护和升级;
●灵活的模块化设计,可定制各种不同研究、应用用途仪器可面向不同应用定制不同配置;
●德国制造工艺,性能一流,保证数据的精确性;
●超过40年的流动室研发经验,经典和创新的完美结合;
●激光搭配灵活,最高五激光十三色,高性能、一体化设计为您的细胞分析提供解决方案;
●可放入生物安全柜中;
●出色的流体动力聚焦,使所有通道荧光变异系数CV≤2 %;
●荧光灵敏度:≤100 MESF(FITC) ;≤50 MESF(PE);
●阈值可多通道调节;
●颗粒检测范围:50nm - 100µm;
●内置CCD摄像机装置,用于流动室检测区液流监控。
光路系统
●最高配备5个光源:可配备用于DNA高精度检测的高能365nm紫外光光源;
●无光纤引导,激光空气传输,避免光纤带来的功率降低和使用成本增加;
●激光器可单独开关,延长激光器寿命;
●采用光电倍增管(PMT)检测器,极低的信号丢失率,可检测低至50nm的颗粒;
●真正的插拔式模块化光路设计,便于维护、保养和升级;
●16个光学参数,13个荧光通道+2×FSC+SSC,(均采用光电倍增管技术,目前主流仪器都采用此类型检测器,确保数据完整记录);
●标准滤光片组;
●光胶耦合成像系统,用于检测微量的细胞因子(选配)。
液路系统
●TVAC细胞绝对计数,节约成本和时间;
●250um×350um专利流动室,孔径大不易堵塞,变异系数CV≤2%;DNA检测CV≤1%;
●进样速度:0.1-20ul/s可调;
●真空泵动力设计,800mbar防止管路堵塞;
●检测速度:25,000 cells/s;
●可选配自动上样器,兼容96孔板,384孔板,可在15min完成96孔板分析。
分选系统
●操作简便,两步操作,选择待分选细胞群,点击分选按钮;
●高生物安全性,无菌、全封闭设计;
●采用专利钻石压电晶体分选技术,保证分选细胞活力;
●低成本,无需等待液流稳定,无需计算液滴延迟。
应用
细胞凋亡的检测与分析
DNA含量检测和细胞周期检测
倍性和基因组大小检测
细胞的增殖检测
细胞毒性的检测
可溶性蛋白质分子的检测
报告基因的检测
细胞因子检测
免疫分型检测
细胞内活性氧水平的检测
细胞膜电位检测
细胞内钙离子浓度检测
微生物检测
CyFlow Space
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